药物基因组和蛋白质组数据集的方法分析•通过TCGA泛癌分析确定了浆液性卵巢癌（SOC）和基底样乳腺癌中周期蛋白E1蛋白水平的比较。5虽然并非所有基底样乳腺癌都是TNBC，但它们显示出显着的分子和组织学重叠6，因此富集了TNBC。为简单起见，我们将这一人群称为~TNBC •乳腺癌细胞系根据分子和组织学特征以及文献来源划分为TNBC或非TNBC 6-8 •乳腺癌细胞系对WEE1i的体外敏感性使用基于细胞的OncoPanel癌细胞系筛选（Eurofins）进行评估。细胞用9个连续稀释的azenosertib培养5天。adavosertib的比较筛选数据来自癌症药物敏感性基因组学（GDSC）数据库9 •使用来自癌细胞系百科（CCLE）10体内动物研究的蛋白质组数据测定乳腺癌细胞系中的Cyclin E1蛋白水平•在12个TNBC CDX和PDX模型中评估了azenosertib的单药治疗功效•在MDAI-MB丨231（CDX）和CTG丨-3103（PDX）两个ADC-NA ï ve模型中分别测试了azenosertib与化疗（紫杉醇）的组合，以及，采用微管抑制剂（MTI）有效载荷ADC（EV）的azenosertib在TNBC的TOP1i有效载荷ADC耐药PDX模型中进行测试•所有肿瘤模型均植入免疫功能低下小鼠皮下。Azenosertib口服给药，紫杉醇腹腔给药，ADC全部静脉给药表1。本研究中使用的ADCs ADC简称目标有效载荷有效载荷类Sacituzumab Govitecan SG TROP2 SN38拓扑异构酶1抑制剂Datopotamab deruxtecan Dato-DXD TROP2 DXD拓扑异构酶1抑制剂曲妥珠单抗deruxtecan T-DXD HER2 DXD拓扑异构酶1抑制剂Enfortumab vedotin EV Nectin-4 MMAE微管抑制剂结果图3。基底样乳腺癌（~TNBC）表现出与受损的G1-S细胞周期检查点调控CCNE1扩增、Cyclin E1表达一致的分子特征，TCGA泛癌数据集TP53突变5癌种总N患病率CCNE1扩增（%）患病率Cyclin E1阳性（%）患病率TP53突变（%）浆液性卵巢癌（SOC）40576/405（19%）253/405（62%）277/405（68%）基底样乳腺癌（~TNBC）12919/129（15%）123/129（95%）113/129（88%）− 50510~TNBC扩增（n = 19）~TNBC non −扩增（n = 110）其他BC All（n = 503）SOC扩增（n = 76）SOC non −扩增（n = 329）CY cl in E 1 ex pr es si on（R PP以及分别在95%和62%的~TNBC和SOC病例中•分别在88%和68%的~TNBC和SOC病例中观察到TP53的频繁丢失• G1-S细胞周期检查点减弱可能导致从TCGA泛癌分析的SOC和~TNBC患者的RPPA数据分析中的高复制应激和易受WEE1抑制的Cyclin E1蛋白表达水平分布（Z-score）的影响。将CCNE1扩增和未扩增分离，红色片段表示CCNE1扩增样本第10个百分位的适应症特异性表达水平（“TPA截止”）。高于TPA截止的表达水平被认为是积极的。图4。TNBC细胞株对WEE1抑制更敏感并且与非TNBC细胞株相比表现出更高的Cyclin E1蛋白表达0.06 0.07 0.08 0.09 TNBC N = 23 A U C（a da vo se rti b do se r es po ns e）Cy cl in E 1 ex pr es si on（r PP a Z-s co re）non-TNBC N = 27 − 10123 TNBC N = 19 non-TNBC N = 21 wilcox p value = 2.74e-06 wilcox p value = 0.065 a U C（a ze no se rti b do se r es po ns e）TNBC N = 7 non-TNBC N = 10 wilcox p value = 0.00460.6 0.7 0.8 0.9 a跨乳腺癌细胞系CBAdavosertib敏感性（GDSC9）跨乳腺癌细胞系Cyclin E1表达（CCLE10）跨乳腺癌细胞系Azenosertib敏感性（Eurofins）A. GDSC数据集中接受adavosertib治疗的乳腺癌细胞系的曲线下面积（AUC）值分布，其中较低的AUC表明药物敏感性增加。B.在Eurofins数据集中使用azenosertib治疗的乳腺癌细胞系的AUC值分布， 其中AUC较低表明药物敏感性增加。C. CCLE数据集TNBC和非TNBC乳腺癌细胞系RPPA数据分析的Cyclin E1蛋白表达水平分布（Z丨评分）。图5。临床相关剂量的azenosertib在多种TNBC异种移植模型的体内1007550250模型分子特征SUM149PT TP53 mut中证明了单药治疗的抗肿瘤活性；BRCA1 mut（↓ 11q）HCC1937 TP53 mut；BRCA1 mut；FAM35A del；RB1 mut MDA-MB-468 TP53 mut；RB1 mut HBCX-17 TP53 mut；BRCA2 mut；AKT1 mut；CDKN2A mut；KDM6A del MDA-MB-436 BRCA1 mut；RB1 mut HCC1806 TP53 mut MDA-MB-231 TP53 mut；KRAS G13D HBCX-10 TP53 mut；BRCA2*% T G I SUM149PTHCC1937 MDA-M B-468*HBCX-17 MDA-M B-436 Ola-R*MDA-M B-436*HCC1806*MDA-M B-231*HBCX-10 HBCX-9 CTG-3103 60mg/kg 80mg/kg AB Azenosertib单药治疗TNBC TNBC异种移植模型中携带多种突变和拷贝数改变的疗效采用60或80mg/kg azenosertib体内治疗。A.每个模型的关键分子特性。B. azenosertib跨模型的抗肿瘤疗效，以肿瘤生长抑制百分比（TGI）表示，使用公式（1-[ TD-0 ]/[ CD-C0 ]）× 100%计算。HBCX-17、HBCX-10、HBCX-9、CTG-3103为PDX型号；其他型号均为CDX。标示为“Nir-R”和“Ola-R”的模型分别产生了对尼拉帕利和奥拉帕利的耐药性。标有*每日一次（QD）连续给药；其他所有型号均采用5：2的方案给药QD。图6。azenosertib与TOP1i有效载荷ADCs联合增强肿瘤生长抑制TNBC异种移植模型中的反应和持续时间01020304050-20-10 01020 m ea n response（%）m ea n response（%）01020304050-20-10 01020 m ea n response（%）0204060-20-10 01020010203040500500100015002000天m ea n TV ± s EM（m m 3）m ea n TV ± s EM（m m 3）m ea n TV ± sEM（mm3）010203040500500100015002000天010203040506070809002505007501000天无TX日59天86天59天860200400600800TV（mm3）T-DXD Azenosertib + T-DXD*ns 28% TGI 71% TGI 91% TGI 28% TGI 98% TGI 103% TGI载体Azenosertib 60mg/kg QD 5：2SG 0.5mg D0,7，21,28，42 Azenosertib 60mg/kg QD 5：2 + SG 0.5mg D0,7，21,28，42车用Azenosertib 60mg/kg QD 5：2 dato-DXD 10mg/kg Q3W Azenosertib 60mg/kg QD 5：2 + dato-DXD 10mg/kg Q3W车用Azenosertib 60mg/kg QD 5：2 T-DXD 3mg/kg Q3W Azenosertib 60mg/kg QDTERM3：2 + T-DXD 3mg/kg Q3W A B MDA-MB-231（TROP2 + TNBC）C D CTG-3103（HER2-低TNBC）TNBC异种移植模型用azenosertib联合携带TOP1i载荷的ADC（n = 8/组）处理。（a，b）用指定剂量的azenosertib和（a）SG或（b）DATO-DXD治疗的MDA-MB-231 CDX的平均TV ± SEM持续46天。抗肿瘤疗效以TGI百分比表示，使用公式（1-[ TD-0 ]/[ CD-C0 ]）× 100%计算得出。插入图描绘了自第0天起体重的平均百分比变化（丨BW），其中黑色虚线表示变化0%，红色虚线表示-15 %。C.用指定剂量的azenosertib和T-DXD治疗的CTG-3103 PDX的平均TV ± SEM。第59天停止治疗，随后监测肿瘤再生长情况，以标有“无TX”的阴影灰框表示。插图描绘了自第0天起体重的平均百分比变化（丨BW），其中黑色虚线表示变化0%，红色虚线表示-15 %。D.治疗最后一天（第59天）与肿瘤再生长监测最后一天（第86天）相比，个体小鼠肿瘤体积的分布。T-DXD组治疗停药后检测到明显的肿瘤再生，经Wilcoxon配对试验P值< 0.016。Azenosertib在ADC敏感模型中增强ADC的抗肿瘤活性• azenosertib与SG（panel A）或DATO-DXD（panel B）的联合在MDA-MB-231肿瘤中具有良好的耐受性并增加了TGI • azenosertib与T-DXD（panel C，d）的联合在MDA-MB-231肿瘤中具有良好的耐受性，并增加了CTG-3103肿瘤中的TGI和应答的持久性表2。TNBC PDX模型临床衍生对SG线耐药患者治疗史治疗时长及反应1多柔比星+环磷酰胺4个周期2紫杉醇+卡铂4个周期，乳房切除伴残留病3卡培他滨8个周期，局部复发4多激酶抑制剂+纳武单抗1个周期，疾病进展5个双特异性抗MUC1 x EGFR ADC6个周期，疾病进展6个Sacituzumab govitecan 2个周期，疾病进展图7。azenosertib联合紫杉醇在PDX模型中增强SG耐TNBC的TGI 05 10152025-20-10 01020 m ea n β B W（%）05 101520250500100015002000天16% TGI7%TGI 51% TGI M ea n TV ± S EM（m m 3）载体Azenosertib 60mg/kg QD 5：2 SG 3 mg/kg D1， 8T-DXD3 mg/kg D1紫杉醇15mg/kg QW Azenosertib 60mg/kg QD 5：2 +紫杉醇15mg/kg QW SG抗性TNBC • SG和T-DXD对照治疗证实对SG和T-DXD均有耐药性，提示TOP1i有效载荷交叉耐药性•除了先前的SG，患者在2L时接受了4个周期的紫杉醇治疗，这可能解释了模型对紫杉醇的耐药性•尽管模型证明了对单药紫杉醇的耐药性，但与azenosertib的联合治疗证明了使肿瘤对紫杉醇重新敏感的潜力•随着TOP1i有效载荷ADC进入1L，azenosertib和紫杉醇联合使用可能是一种很有前景的治疗策略ADC治疗后用azenosertib +/丨紫杉醇（n = 8/组）治疗的SG耐药PDX模型的平均TV ± SEM。抗肿瘤疗效以TGI百分比表示，使用公式（1-[ TD-0 ]/[ CD-C0 ]）× 100%计算得出。插图图表描绘了自第0天起体重的平均百分比变化（丨BW），其中黑色虚线表示变化0%，红色虚线表示-15 %。图8。azenosertib与MTI有效载荷ADC（EV）联合诱导肿瘤消退并在耐TOP1i载荷ADC（SG）的TNBC PDX模型中完成响应0102030-20-10 01020 m ea n β B W（%）M ea n TV ± S EM（m m 3）01020177% TGI 101% TGI 112% TGI 300500100015002000天-100治疗组PR在第25天CR在第25天EV 2/8（25%）0/8（0%）Azenosertib + EV 1/8（12.5%）7/8（87.5%）-50 050100150200%肿瘤体积变化Ø T V a t da y 25（%）-30 %-100 % EV Azenosertib + EV Vehicle Azenosertib 60mg/kg QD 5：2 SG 3mg/kg D1,8 T-DXD 3mg/kg D1 EV 3mg/kg D1,8，15（28d循环）Azenosertib 60mg/kg 丨QD 5：2 + EV3 mg/kg D1,8，15 BA SG耐药TNBC A。用azenosertib +/丨EV（n = 8/组）处理的SG耐药PDX模型的平均TV ± SEM。抗肿瘤疗效用第22天相对于载体组的TGI百分比表示，使用公式（1-[ TD-0 ]/[ CD-C0 ]）× 100%计算得出。插图图描绘了自第0天起体重的平均百分比变化（丨BW），其中黑色虚线表示变化0%，红色虚线表示-15 %。B.显示治疗最后一天（第25天）个体小鼠TV（↓ TV）变化百分比的瀑布图，使用公式（[ TVD – TV0 ]/TV0）× 100%计算得出。橙色虚线表示-30 %的变化，对应部分响应阈值（PR）。蓝色虚线表示-100 %的变化，对应完全响应（CR）。表总结了第25天观察到的PR和CRs的频率；在第25天之前或之后发生的任何PR或CRs均未在此反映，但可以在图9B中看到。图9。azenosertib与EV联合驱动持久的肿瘤反应并在抗SG TNBC M EA n TV ± S EM（mm3）治疗组PDX模型中扩展PFS MEDROR MEDRO12天22天Azenosertib + EV > 56天未达到0102030405060700500100015002000天无TX 0102030405060700255075100进展日时间PR og re ss io n-Fr ee S ur vi va l（%）0102030405060701234567812345678天M IC E车辆Azenosertib 60mg/kg QD 5：2 SG 3mg/kg D1,8 T-DXD 3mg/kg D1 EV 3mg/kg D1,8，15（28d周期）Azenosertib 60mg/kg丨5：2 + EV 3mg/kg D1,8，15 EV Azenosertib + EV Azenosertib + EV PD SD PR CR持续响应EOT A CB A。用azenosertib +/丨EV（n = 8/组）治疗的SG抗性PDX模型的平均TV ± SEM。第25天后停止治疗，此后监测肿瘤再生长，用标有“无TX”的灰色阴影框表示。观察到azenosertib + EV组在第52、56、59天仅有3只小鼠发生肿瘤再生，第63天平均TV保持在17mm3较小。B.描绘个体小鼠治疗反应的游泳者情节。虚线表示第25天治疗结束（EOT）。C. PFS KAPLAN-Meier图，定义为从开始治疗到记录疾病进展的时间，其中进展定义为比记录的最小肿瘤体积增加> 20%：通过对数秩（Mantel-Cox）检验得出P值< 0.0001，HR：0.14,95% CI：0.036-0.52。该表汇总了中位缓解持续时间（DOR）和中位PFS。DOR被定义为从第一次PR到PD的时间。组合组的DOR中值包括最终测量时的5名持续响应者。图10。与单药治疗EV TV（MM3）TV（MM3）相比，用azenosertib + EV对SG-或T-DXD进展的肿瘤进行序贯治疗可提供强大的抗肿瘤活性0102030405060700500100015002000用EV Days重新发起挑战0102030405060700500100015002000用Azenosertib + EV Days重新发起挑战SG 3 mg/kg D1,8 T-DXD 3 mg/kg D1 EV 3 mg/kg D15,22，29,43，50,57 Azenosertib 60 mg/kg QD 5：2 + EV 3 mg/kg D15,22，29,43，50，57 A B Spider绘图显示携带SG耐药PDX肿瘤的个体小鼠的电视，这些小鼠首次接受SG或T-DXD治疗14天， 重新随机分为新的组，以尽量减少先前治疗的影响，然后在第15天用（a）单药EV（n = 7），或（b）联合azenosertib + EV（n = 8）再次挑战。重新挑战开始时第15天的平均电视播放量为850-950mm3。治疗和肿瘤测量一直持续到第63天。结果背景• WEE1激酶通过调节G1-S和G2-M细胞周期检查点来维持基因组完整性，以防止DNA受损的细胞进展到下一阶段• Azenosertib是一种有效的选择性口服WEE1抑制剂，目前处于临床开发阶段•用azenosertib治疗肿瘤细胞会促进细胞周期过早进展，导致复制应激增加、DNA损伤积累，最终导致有丝分裂灾难和细胞死亡1 • TP53失活和Cyclin E1过表达等机制通常会破坏肿瘤中的G1-S检查点，增加内在复制应激和对G2-M检查点的依赖，从而使肿瘤细胞更容易受到WEE1抑制•虽然在Cyclin E1阳性铂耐药卵巢癌（PROC）2中观察到了azenosertib具有临床意义的活性，但其他适应症可能具有类似的高水平复制应激，并可能受益于WEE1抑制•三阴性乳腺癌（TNBC）占美国每年诊断的乳腺癌的15%-20 %，是一种特别具有侵袭性的亚型，患者的靶向治疗有限•尽管最近免疫检查点抑制剂和抗体药物偶联物（ADC）的批准改善了一些TNBC患者的预后，但疾病进展仍然频繁，强调ADC有效载荷交叉耐药3,4等限制，并强调需要新的治疗策略图1。azenosertib DNA损伤的作用机制磷酸化，引起CDK1/2 Cyclin E1 CDK2 G2 M G1 S G1-S检查点G2-M检查点Cyclin失活CDK WEE1 CDK2无活性CDK1无活性WEE1细胞增殖DNA损伤修复的G2 M G1 S G1-S检查点G2-M检查点Cyclin E1 CDK2 Cyclin TERM0 CDK CDK Azenosertib Azenosertib WEE1 CDK2活性CDK1活性WEE1有丝分裂灾难和死亡DNA损伤积累正常的细胞周期调节作用图2。ADCs有潜力重塑TNBC疾病进展的治疗格局和对类似有效载荷的交叉耐药正在成为临床上相关未满足的需求1L pembrolizumab +化疗（if PD-L1 +）化疗，通常是紫杉烷/铂（if PD-L1-）PARPI（if gBRCA +）Ph3 ASCENT-04：Sacituzumab govitecan + pembrolizumab（if PD-L1 +）Ph3 TROPION-Breast05：Datopotamab deruxtecan + durvalumab（if PD-L1 +）Ph3 ASCENT-03：Sacituzumab govitecan（if PD-L1-）Ph3 TROPION-Breast02：Datopot靶向治疗3L化疗曲妥珠单抗deruxtecan（如果HER2-低且以前未使用）PARPI（如果GBRCA +且以前未使用）其他生物标志物导向、靶向治疗•拓扑异构酶1抑制剂（TOP1i）有效载荷ADC目前被批准用于≥ 2L环境下的TNBC治疗，并正在迅速向1L使用推进•使用具有相同有效载荷等级的ADC的顺序治疗已显示出有限的临床益处3,4，突出了替代ADC后治疗策略的必要性结论• TNBC可能具有高复制应激，并且在体外和体内对WEE1抑制敏感–大多数~TNBC表现出高周期蛋白E1蛋白表达和TP53突变，表明该患者群体中存在失调的G1-S检查点控制和高水平的复制应激–与非TNBC乳腺癌细胞株相比，TNBC细胞株表达更高水平的周期蛋白E1，并在体外显示出对WEE1药物抑制的敏感性增加– Azenosertib表现出有意义的体内单药治疗活性（范围，42%-99 % TGI）横跨12个TNBC异种移植模型的分子多样性面板–在ADC-nave ï ve模型中，与azenosertib和TOP1i载荷ADC（SG、DATO-DXD或T-DXD）的联合治疗进一步增强了抗肿瘤功效，与单一疗法治疗相比，改善反应深度和持续时间• Azenosertib组合可能是TOP1i-ADC耐药TNBC的有希望的治疗策略– Azenosertib在来自经过大量预处理的TNBC患者（包括先前的紫杉醇和TOP1i-ADC）的PDX中联合使用时恢复了对紫杉醇的敏感性– Azenosertib + EV组合导致了TOP1i-ADC耐药TNBC模型中的大多数完全反应– Azenosertib + EV组合显着延迟了复发， 而单药EV治疗在TOP1i – ADC –耐药模型中导致复发的速度至少快一倍且频率更高–将azenosertib与EV联合使用有可能提高单独使用EV在乳腺癌患者中观察到的临床疗效11（NCT04225117），尤其是在先前接受过SG参考文献1治疗的TNBC患者中。Kim D等NPJ Precis Oncol。2025;9(1):3.2.Simpkins F，et al. presented at the SGO Annual Meeting 2025。摘要814654。3.Tarantino P，et al. J Natl Cancer Inst。2025;117(11):2327‑2335.4.Huppert LA，et al. NPJ乳腺癌。2025;11(1):34.5.Akbani R，et al. Nat Commun。2014;5:3887.6.Dai X，et al. J Cancer。2017;8(16):3131‑3141.7.Chavez KJ，et al. breast dis。2010;32(1‑2):35‑48.8.美国类型文化收藏2022。三阴性乳腺癌面板。2022.访问日期：2026年3月6日。https://www.atcc.org/丨/media/product--assets/documents/panels/cell-biology/triple-negative-breast-cancer-panels.pdf？rev = 67ddbf2f83dd415d88f367b4b3ab9fc3。9.Garnett MJ等人Nature。2012;483(7391):570‑575.10.Chen MM，et al. JCO Clin Cancer Information。2030;4:357‑366.11.佐丹奴A等J Clin Oncol。2024；42：16 _ Suppl：1005-1005。致谢本研究由Zentalis Pharmaceuticals, Inc.赞助。动物研究分别在康龙化成（宁波/北京）、冠军肿瘤、Crown Bioscience（北京）进行。这张海报的编辑支持由Second City Science，LLC提供。有关本研究的更多信息，请访问www.zentalis.com或联系publications@zentalis.com。简称1L，一线；2L，二线；3L，三线；5：2,5天开、2天休；ADC，抗体药物偶联物；AMP，扩增；AUC，曲线下面积；BC，乳腺癌；丨BW，体重变化；BRCA，乳腺癌基因；CCLE，癌细胞系百科；CCNE1，Cyclin E1；CDK，细胞周期蛋白依赖性激酶；CDX，细胞系衍生异种移植物；CI，置信区间；CR，完全应答；D，日；DATO-DXD，datopotamab deruxtecan；del，缺失；DOR，应答持续时间；EGFR，表皮生长因子受体；EOT，治疗结束；EV人乳腺癌异种移植物；HER2，人表皮生长因子受体2；HR，激素受体；KRAS，Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物；MMAE，monomethyl auristatin E；MTI，微管抑制剂；mut，突变；Nectin-4，nectin细胞粘附分子4；ns，不显著；PARPI，poly（ADP丨核糖）聚合酶抑制剂；PD，进行性疾病；PD-L1，程序性死亡配体1；PDX，患者来源的异种移植物；PFS；无进展生存期；PH，期；PR，部分应答；QD，每日一次；QW，每周一次；Q3W，3周一次；RB1，视网膜癌症基因组图谱；T-DXD，曲妥珠单抗deruxtecan；TGI，肿瘤生长抑制；TNBC，三阴性乳腺癌；TOP1i，拓扑异构酶1抑制剂；TP53，肿瘤蛋白53；TPA，扩增的第十个百分位；TROP2，滋养层细胞表面抗原2；↓ TV，肿瘤体积变化；TV，肿瘤体积；TX，治疗。发表于：美国癌症研究协会（AACR），2026年4月17日-22日，美国加利福尼亚州圣地亚哥海报# 3902 WEE1抑制作为三阴性乳腺癌的治疗策略：评估Azenosertib在临床前模型中的单药和联合活性Catherine Lee、Alexandra Levy、Mona Abed、Heekyung Chung、Olivier Harismendy、Doris Kim丨Zentalis Pharmaceuticals，Inc.丨圣迭戈，附件 99.2，美国丨展览丨TERM3